無菌制劑容器密封完整性的檢測應(yīng)用越來越多，美國藥典USP 1207及中國2015版無菌藥品GMP檢查指南都明確提到了無菌藥品容器的密封完整性檢測方法主要包括色水法（染色侵入法）、微生物挑戰(zhàn)驗(yàn)證方法（細(xì)菌挑戰(zhàn)）、真空衰減法為代表的無損密封試驗(yàn)方法、高壓放電法、激光頂空分析法等。本文簡要?dú)w納一下幾種密封完整性方法的分類、原理、特點(diǎn)。

一、各種無菌制劑容器包裝完整性驗(yàn)證方法介紹

USP 1207詳細(xì)闡述了5種確定性檢測方法：激光法、高壓放電法和真空衰減法、色水法、微生物挑戰(zhàn)法。其中傳統(tǒng)的微生物挑戰(zhàn)法、色水法屬破壞性方法，真空衰減、激光頂空、高壓放電方法為無損、定量、精度高的檢測方法，無損檢測方法受到部分FDA及歐盟審計(jì)官的明確推薦。
　　通常，我們將所有的驗(yàn)證方法分為如下三大類：
　　第一類：微生物挑戰(zhàn)驗(yàn)證方法，包括微生物挑戰(zhàn)法；
　　第二類：化學(xué)驗(yàn)證方法，包括染色侵入法，即色水法；
　　第三類：物理驗(yàn)證方法，包括高壓放電法、真空衰減法和激光頂空分析法。

二、各種包裝密封完整性檢測方法原理和特點(diǎn)

1、微生物挑戰(zhàn)驗(yàn)證方法

　　微生物挑戰(zhàn)法，顧名思義，就是用微生物侵入實(shí)驗(yàn)對制藥容器軋蓋密封系統(tǒng)進(jìn)行挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，以確認(rèn)軋蓋后容器密封系統(tǒng)的完好性。首先，在西林瓶中灌入已滅菌的培養(yǎng)基，經(jīng)過正常的生產(chǎn)線進(jìn)行抽真空、壓塞、軋蓋后，將容器密封面浸入高濃度（如108個(gè)/ml）運(yùn)動(dòng)性菌液中，一段時(shí)間后取出，對容器外表面消毒并在合適的環(huán)境中放置一段時(shí)間后檢查是否有微生物浸入，以此確認(rèn)容器封裝口的密封完整性。同時(shí)，須做陽性對照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長能力。

微物物挑戰(zhàn)（微生物侵入法）MIST-01

2、染色侵入法（色水法）

　　USP 1207也將色水法和微生物挑戰(zhàn)法歸類為概率性檢測方法?；玖鞒淌菍o菌制劑容器置于密閉的環(huán)境中，然后抽真空至一定真空度，再灌入染色液（例如0.1%亞甲基藍(lán)水溶液），然后恢復(fù)至正常氣壓并保持一段時(shí)間，存在破口的無菌制劑容器由于存在內(nèi)外壓差，染色液將進(jìn)入容器內(nèi)部，然后通過肉眼即可將存在密封完整性缺陷的容器檢出。
　　染色侵入法作為一種使用簡單且有效率的檢漏方法，幾十年來在制藥行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用，包括USP 31<381> PH.Eur.3.2.9，ISO 8362-5 Annex C，Modified ISO等機(jī)構(gòu)對染色液、真空度、真空度保持時(shí)間、常壓保持時(shí)間等參數(shù)進(jìn)行了明確規(guī)定。但染色侵入法檢測靈敏度、可靠性不高，是一種破壞性、非定量的檢測方法，同時(shí)存在微小漏孔容易堵塞、染料在更大體積中被稀釋、染料褪色、樣品污染等風(fēng)險(xiǎn)，將逐步被無損、定量的檢漏方法所替代。

LEAK-02密封性測試儀

    色水法與微生物挑戰(zhàn)法二者區(qū)別示例：微生物挑戰(zhàn)法是將密封、滅菌后的空包裝系統(tǒng)浸入高濃度銅綠假單胞菌的菌懸液中,施加特定壓力驅(qū)動(dòng)并保持4 h,取出后于33℃培養(yǎng)7 d;色水法是將密封后的空包裝系統(tǒng)浸沒于10％亞甲基藍(lán)水溶液中,放入真空箱中抽至75 kPa并保持30 min,恢復(fù)常壓后繼續(xù)浸沒30 min,取出,沖洗,目視檢查.結(jié)果顯示,微生物挑戰(zhàn)法和色水法對1、3、5、10μm孔徑的打孔樣品陽性檢出率分別為0、30％、40％、100％和0、0、4.5％、15％;10％陽性檢出率的靈敏度分別為2.2、8.3μm.說明對于注射劑瓶包裝,微生物挑戰(zhàn)法的靈敏度略優(yōu)于色水法。

3、真空衰減法

　　真空衰減法是一種確定性檢漏方法。作為一種無損、可靠的檢漏方法，檢測精度可達(dá)1.5μm。此方法獲得了FDA推薦，ASTM（美國材料試驗(yàn)學(xué)會(huì)）對此方法推出了包裝容器無損檢漏的測試標(biāo)準(zhǔn)ASTM F2338-09。
　　真空衰減法的基本原理是將無菌制劑容器置于專門的測試腔體中，對測試腔體抽真空，容器內(nèi)外壓差使得容器內(nèi)部氣體通過漏孔泄漏進(jìn)入測試腔體，主機(jī)壓力傳感器監(jiān)測到壓力的變化，將壓力變化值和參考值做比較，以判定容器是否合格。

　　
真空衰減法測試無蓖制劑包裝密封完整性原理圖

4、激光頂空分析法

　　激光檢測法是運(yùn)用TDLAS（可調(diào)諧半導(dǎo)體激光吸收光譜）激光檢測技術(shù)檢測無菌制劑容器密封完整性的一種無損、定量方法，該方法獲得了FDA、美國藥典及歐盟藥典推薦，檢測精度優(yōu)于1μm。氧氣分子對760nm激光具有吸收效應(yīng)，根據(jù)Beer-Lamber（比爾-朗伯）光學(xué)吸收定律，被測氣體對激光的吸收量與氣體濃度成正比，通過光學(xué)相干技術(shù)獲得激光的二次諧波光譜圖，二次諧波光譜圖的幅值變化與容器中氧氣濃度相對應(yīng)，從而判斷容器的密封完整性。

　　
激光頂空法無損測試無菌制劑包裝密封完整性原理圖
 

    以上為無菌制劑容器密封完整性的檢測方法、原理、特征的歸納介紹。目前國內(nèi)GMP提到完整性測試無菌藥品，其包裝密封完整性測試更多是針對容器本身的密封性能，仍然采用的傳統(tǒng)的微生物挑戰(zhàn)法、色水法較多，投入成本較低，近幾年陸續(xù)引入無損的真空衰減法、高壓放電法、激光法等方法。 山東泉科瑞達(dá)儀器為專業(yè)藥包材檢測儀器制造與服務(wù)商，已與國內(nèi)藥企建立了廣泛的合作，我們希望以公司技術(shù)實(shí)力為依托為業(yè)內(nèi)提供更多的量身訂制藥包材檢測儀器與服務(wù)，更好的為我國醫(yī)藥醫(yī)療行業(yè)質(zhì)量控制貢獻(xiàn)力量。